rtage.com
豆甾醇主要來源于大豆、玉米、燕麥、花生等油料農作物,屬于一種植物甾醇?;瘜W式為C29H48O,易溶于醋酸乙酯,苯,氯仿等有機溶劑,微溶于丙酮和乙醇,幾乎不溶于水。豆甾醇含有多個羥基,可通過氫鍵和自由基結合,抑制氧化應激,如提升超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)的活性,減少細胞氧化損傷。抑制炎癥因子(如IL-6,TNF-α)的生成,減輕炎癥反應。
檢測樣本中的豆甾醇的含量,主要方法包括高效液相色譜(HPLC),氣相色譜(GC)等。以HPLC為例,簡單的介紹一下流程。如要實驗操作,可參考相關的文獻資料或操作規(guī)程,確保有成功的案例可依據。
1.樣品處理
將植物的樣本進行粉碎過篩處理,加入乙酸乙酯進行超聲提取,定容,最后進行膜過濾。
2.色譜條件
C18的色譜柱,250mm或150mm長,4.6mm內徑,5um粒徑。柱溫為室溫。以乙腈-水或甲醇-水(97:3)為流動相,等度洗脫。紫外檢測器,波長210nm或蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)。流速0.8-1ml/min,進樣量10-20uL。僅供參考,在實際操作過程中,需要結合樣本的特性或周邊環(huán)境進行設置。如果色譜峰出現(xiàn)不規(guī)則的情況,需要適當?shù)恼{整。
3.標準曲線
標準曲線是通過梯度稀釋的6個標準溶液濃度點,對應它的色譜峰面積,在表格中擬合出來的。同時,保證標準曲線過坐標軸的原點,上方的回歸方程相關系數(shù)r2大于0.999,并接近于1。
4.含量測定
樣本溶液進到HPLC中,根據標準品色譜峰的保留時間,可以找到豆甾醇的色譜峰。外在的色譜條件都沒有變化,出峰的時間也不會變的。對這個樣本的色譜峰面積進行積分,并代入到回歸方程,可計算出樣本溶液中的豆甾醇含量。