視黃醇是維生素A的形式之一，是維生素A的衍生物，它主要來自豬肝、胡蘿卜、蘋果、芒果等。視黃醇的化學(xué)式為C20H30O，分子量為286.45，是一種脂溶性的維生素，具有酯環(huán)結(jié)構(gòu)，含有5個共軛雙鍵?；瘜W(xué)性質(zhì)活潑，如氧氣、陽光等因素，很容易被氧化分解或異構(gòu)化。視黃醇可溶于甲醇、氯仿、醚等有機(jī)溶劑，幾乎不溶于水或甘油。它可促進(jìn)生成膠原蛋白，加速角質(zhì)代謝，調(diào)節(jié)細(xì)胞分化等，常用于護(hù)膚和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。

檢測樣本中視黃醇的含量，實驗室一般采用高效液相色譜（HPLC）、液相串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、分光光度法等。這里以HPLC為例，簡單的介紹一下檢測的流程。

1.樣本前處理

假如是血清的樣本，可取0.5ml的血清，加入1ml的乙腈，振蕩混勻60s，在12000rpm的離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)15min。取上清液，加入2ml的正己烷萃取，轉(zhuǎn)移有機(jī)相，使用氮吹干。再加入100uL的甲醇復(fù)溶，待測。

2.色譜條件

如果要測的是視黃醇的單體含量，可用甲醇和水（85:15）為流動相，等度洗脫，或者采用乙腈和四氫呋喃，梯度洗脫。使用常規(guī)的反相色譜柱C18，250mm長，4.6mm內(nèi)徑，5um粒徑。柱溫的話，不能隨意設(shè)置的，一般在30-40℃，溫度波動不要太大，否則會影響到出峰或基線的穩(wěn)定性。一般的流速可設(shè)置為1ml/min，進(jìn)樣量10-20uL。紫外檢測器，波長325-340nm。根據(jù)樣本的復(fù)雜程度進(jìn)行調(diào)整。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

將視黃醇的標(biāo)準(zhǔn)品通過甲醇溶解，定容到一定體積，配制成標(biāo)準(zhǔn)母液。梯度稀釋5-7個濃度點(diǎn)，這個稀釋的倍數(shù)是根據(jù)樣本的濃度來確定的。確保標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋的范圍能夠覆蓋到樣本濃度的可能范圍，確定一下檢測限。依次進(jìn)樣到HPLC中，記錄色譜峰的保留時間，對色譜峰面積進(jìn)行積分，擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)1≥R2≥0.999，回收率>90%，RSD符合要求。

4.含量測定

樣本進(jìn)樣到HPLC中，根據(jù)保留時間，找到視黃醇的色譜峰。對色譜峰面積進(jìn)行積分，因為色譜條件是不變的，可以代入到回歸方程，計算出樣本溶液中的視黃醇含量。