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獐牙菜苦苷屬于環(huán)烯醚萜類化合物,是龍膽科獐牙菜屬植物中的主要成分之一,在生理活性方面,獐牙菜苦苷具有解痙鎮(zhèn)痛、保肝利膽、抗炎、抗氧化應(yīng)激等方面的作用。獐牙菜苦苷的化學(xué)式為C16H22O10,分子量為374.34,易溶于甲醇、乙醇,微溶于水,不溶于氯仿、石油醚。
檢測(cè)方法:高效液相色譜(HPLC),包括前處理,色譜條件,標(biāo)準(zhǔn)曲線,含量計(jì)算等。
1.樣品處理
將樣本磨成粉末,過(guò)三號(hào)篩,精確稱量0.1g樣本放置于具塞錐形瓶中,加入50ml的甲醇,塞緊塞子。稱取重量并記錄一下數(shù)據(jù),超聲處理(250W,40Hz)20分鐘,放冷。這個(gè)時(shí)候,再稱取一下重量,用甲醇補(bǔ)足丟失的重量,搖勻,0.22um膜過(guò)濾,待測(cè)。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mm長(zhǎng),4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑,紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)238nm。以甲醇和水(20:80)為流動(dòng)相,等度洗脫,流速1ml/min,進(jìn)樣量10ul。理論塔板數(shù)不低于3000。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
精確稱取獐牙菜苦苷的對(duì)照品,用甲醇進(jìn)行溶解,配制成60ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)母液,并梯度洗脫6個(gè)濃度點(diǎn)。進(jìn)樣到HPLC中,記錄色譜峰的保留時(shí)間,對(duì)峰面積進(jìn)行積分,對(duì)應(yīng)各個(gè)峰的濃度,擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品測(cè)定
將樣品溶液進(jìn)樣到HPLC,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間,找到樣品色譜圖中的對(duì)應(yīng)的色譜峰。對(duì)獐牙菜苦苷的色譜峰面積進(jìn)行手動(dòng)或自動(dòng)積分,并代入到回歸方程,可計(jì)算出樣品溶液中的獐牙菜苦苷的含量。