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人參皂苷rd是一種三萜皂苷類化合物,也是四環(huán)三萜類的衍生物,來源于五加科植物人參的根、花蕾、葉、蘆頭、莖等部位,以及葫蘆科植物的絞股藍的葉,三七等。人參具有大補元氣,滋補強壯,安神益智等作用。人參皂苷rd的化學式為C48H82O18,分子量為947.15,易溶于水、甲醇、乙醇,不溶于乙醚、苯。通過實驗室的科學研究,它屬于稀有人參皂苷成分,能抑制NF-κB等炎癥通路,降低IL-6、TNF-α等促炎因子水平。還具有神經(jīng)保護,抗炎,調(diào)節(jié)代謝等多種生物活性。
檢測方法:高效液相色譜(HPLC)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)法等。
1.樣品前處理:
樣品粉碎均勻,過60目篩,精確稱取混勻樣品 0.1g左右于20ml棕色離心管中,然后加入10ml 甲醇水提取液(9:1),振蕩混勻 1min。密封后在 60 度水浴中超聲振蕩提取60min。結(jié)束后,轉(zhuǎn)移上清液于 20ml 棕色離心管。重復提取一次,合并兩次提取液,用甲醇定容至 20ml,振蕩混勻,取適量上清液稀釋10倍后上機測定。
2.色譜或質(zhì)譜條件
采用C18的色譜柱,柱溫30-40℃,乙腈和水或0.1%甲酸水和乙腈為流動相,梯度洗脫。根據(jù)是否聯(lián)用質(zhì)譜(MS),流速和進樣量也會發(fā)生變化。比如直接用HPLC的UV檢測器,波長203nm,色譜柱的柱溫30℃,連接質(zhì)譜檢測器的時候柱溫可能為40℃。色譜測的時候進樣量10uL,連接質(zhì)譜的時候進樣可能2-5uL。
3.標準曲線
配制梯度的人參皂苷rd標準品溶液(如0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mg/mL),根據(jù)測出來的色譜或離子峰,對峰面積進行積分處理,和它對應的濃度,擬合出標準曲線,得到回歸方程,確保相關系數(shù)R2≥0.999。
4.含量計算
通過測定樣品溶液的色譜峰或質(zhì)譜峰,代入到回歸方程,可計算出樣品溶液中的人參皂苷rd的含量。