細(xì)胞色素P450是什么呢？它是一個很大的家族啊。是可自身氧化的亞鐵血紅素蛋白，因為能夠在450nm波長的地方能夠擁有特異的吸收峰，因此就稱為細(xì)胞色素P450。為什么要研究細(xì)胞色素P450呢，因為它是藥物代謝過程中的關(guān)鍵酶，對細(xì)胞因子和體溫調(diào)節(jié)有重要的影響。細(xì)胞色素P450主要存在于細(xì)菌、真菌、植物和動物的線粒體和微粒體中，藥物主要作為細(xì)胞色素P450的底物、抑制劑或誘導(dǎo)劑。

檢測細(xì)胞色素P450的方法有多種，比如ELISA試劑盒，ELISA是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗。它是將待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，在處理過后，加入到微孔板中，按說明書的操作步驟完成反應(yīng)，微孔中產(chǎn)生的顏色和樣品濃度是呈線性關(guān)系的，通過酶標(biāo)儀檢測吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計算出樣品中細(xì)胞色素P450的含量。

今天我們了解一下高效液相色譜（HPLC）法。它是一種常用的測定細(xì)胞色素P450（CYP450）含量的方法，在檢測的過程中離不開有效的操作步驟。從廣義上來說，細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素P450酶是一個東西。

第一步，就是對樣品進行處理。這里呢，主要是從細(xì)胞或組織中將P450酶給提取出來，通常涉及到裂解和制備的過程，可參考相關(guān)實驗要求進行，注意提取過程中的條件和參數(shù)。

第二步，選擇適合CYP450酶的特異性底物，也就是將這個底物和CYP450酶結(jié)合起來，可以通過HPLC的檢測器清晰的分辨并獲得信號數(shù)據(jù)，從而便于進一步的分析。

接著呢，就是要對檢測條件進行優(yōu)化。其實，就是確定HPLC檢測過程中的參數(shù)。比如，色譜柱的選擇，流動相的配制，進樣量，進樣速率，柱溫，檢測器，檢測波長等。如果有現(xiàn)成的方法可以用，如果沒有的話，就要驗證，獲得最佳的參數(shù)后再繼續(xù)下去。對樣品進行處理，通過比較標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品中的CYP450的含量。